國產激光共聚焦顯微鏡的核心在于利用激光作為光源，通過一系列精密光學組件實現(xiàn)對樣品的高精度成像。激光束經照明針孔后形成點光源，聚焦于樣品上的特定微小區(qū)域，激發(fā)樣品中的熒光分子發(fā)光。這些被激發(fā)出的熒光信號攜帶著樣品的結構與成分信息，沿著原路返回，穿過物鏡、共聚焦針孔后，被光電探測器接收。
 

　　共聚焦針孔起著關鍵作用，只允許來自焦平面上那一點光信號通過，而偏離焦平面的光信號則被阻擋。這樣一來，通過逐點掃描樣品，就能獲取不同層面的清晰圖像。計算機系統(tǒng)會對這些掃描數據進行處理與整合，構建出樣品的三維立體圖像，讓研究者能直觀洞察樣品內部的微觀結構與動態(tài)變化。
 

　　國產激光共聚焦顯微鏡的測定步驟：
 

　　1.開機準備：
 

　　-按順序打開總電源、顯微鏡控制器、激光器等設備，最后啟動電腦和相應操作軟件。
 

　　-等待硬件自檢完成，確保儀器狀態(tài)正常。
 

　　2.樣品放置與觀察：
 

　　-將制備好的熒光標記樣品(如細胞、組織切片)置于載玻片或專用培養(yǎng)皿中，蓋玻片厚度需≤0.17mm。
 

　　-在明場模式下調整物鏡(如2.5x、10x低倍鏡)找到樣品位置，切換至熒光模式(RL)觀察熒光分布。
 

　　3.參數設置：
 

　　-激發(fā)與檢測配置：根據熒光探針的激發(fā)/發(fā)射波長選擇激光光源、濾光片及探測器通道。
 

　　-掃描模式：選擇點、線、面或3D掃描方式，設置分辨率(如1024×1024)和掃描速度。
 

　　-光學參數：調節(jié)針孔大小(通常1AU)、激光強度、增益值(Gain<800)以避免過曝。
 

　　4.圖像采集：
 

　　-使用“Smart Setup”添加通道并選擇信號模式(如Best Signal模式避免串色)。
 

　　-設置掃描范圍(Scan Area)、層掃間距(Z-Stack)或時間序列參數(Time-Series)。
 

　　-點擊“Live”實時觀察，調整焦平面后保存圖像(格式如CZI或TIFF)。
 

　　5.關機維護：
 

　　-按開機反向順序關閉軟件、激光器、電源，注意鹵化燈關閉后30分鐘內勿重啟。
 

　　-清潔物鏡(油鏡需擦拭干凈)，確保無殘留油污或熒光染料。